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大家好！今天为大家介绍小鼠骨髓造血干细胞的流式检测全流程。造血干细胞可以说是血液系统的种子细胞，它们具有自我更新和多向分化的能力，能够生成所有类型的血细胞和免疫细胞。研究造血干细胞对理解血液疾病具有重要意义。
造血干细胞主要来源有三个。第一是骨髓，存在于人体的骨髓腔中，如髂骨、胸骨、脊柱等部位，能够不断地分化和增殖，生成各种血细胞。第二是外周血，正常情况下造血干细胞含量极少，但可以通过药物动员增加含量。第三是脐带血，是残留在胎盘和脐带中的血液，具有免疫原性低、配型要求相对较低等优点。
本次实验采用小鼠骨髓细胞作为样本。样本制备包括五个关键步骤：首先取出小鼠腿部，分离肌肉，取出股骨与胫骨，浸泡在预冷的PBS加百分之二FBS中。然后剪开骨头两端，用注射器吹出骨髓。接着用注射器反复吹吸打散细胞。再在4度下离心，用ACK溶液溶解红细胞。最后重悬细胞并计数，正常细胞数为五到八乘以十的七次方。
染色步骤包括：取一乘以十的六次方个细胞，调整体积至一百微升，加入各种荧光素标记的抗体，在四度摇床上避光孵育十五分钟。然后四百g离心五分钟，弃上清，用BSA PBS洗涤，最后重悬细胞进行上机分析。这个过程需要轻柔操作，避免细胞丢失。
圈门策略是流式分析的关键步骤。首先用FSC-A和SSC-A圈出目的细胞群，然后排除粘连体和死细胞，圈出Lin阴性细胞群。主要的细胞亚群包括LSK细胞，以及进一步细分的长期造血干细胞、短期造血干细胞和多能祖细胞等。这套流式检测方案能够准确识别和定量小鼠骨髓中的造血干细胞及其亚群，为血液学研究提供可靠的技术支持。
造血干细胞主要来源有三个。第一是骨髓，存在于人体的骨髓腔中，如髂骨、胸骨、脊柱等部位，骨髓中的造血干细胞能够不断地分化和增殖，生成各种血细胞。第二是外周血，正常情况下外周血中的造血干细胞含量极少，但通过使用粒细胞集落刺激因子等药物，可以动员骨髓中的造血干细胞释放到外周血中。第三是脐带血，是胎儿娩出后残留在胎盘和脐带中的血液，其中含有丰富的造血干细胞，具有免疫原性低、供体来源广泛、配型要求相对较低等优点。