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DIC显微镜是一种先进的光学显微镜技术,专门用于观察透明的未染色样本。它的核心原理是利用偏振光和特殊的棱镜系统,将光束分成两束正交偏振的光,这两束光通过样本的不同区域,产生相位差,最终转化为可见的对比度。
DIC显微镜的工作从偏振光的产生开始。首先,普通光源发出的非偏振光通过偏振器,变成线偏振光。然后,这束偏振光进入诺马斯基棱镜,被分裂成两束正交偏振的光束,一束是s偏振光,一束是p偏振光。关键是,这两束光会产生微小的横向位移,称为剪切,使它们通过样本的相邻但略有不同的区域。
当两束正交偏振光通过样本时,关键的物理过程发生了。由于样本不同区域具有不同的折射率或厚度,两束光会经历不同的光程。高折射率区域会使光速减慢,而低折射率区域光速相对较快。这种光程差异直接导致两束光之间产生相位差,相位差的大小与折射率差和样本厚度成正比。这个相位差是DIC显微镜能够产生对比度的物理基础。
接下来是光束重组和相位差转化的关键步骤。经过样本的两束光首先被物镜收集,然后进入第二个诺马斯基棱镜进行重组。重组后的光束包含了样本的相位信息。当这束光通过与第一个偏振器正交的检偏器时,神奇的转化发生了:两束光之间的相位差被转化为可见的强度差异。最终的光强度遵循余弦平方定律,相位差越大,强度变化越明显,从而产生高对比度的图像。
最终,DIC显微镜形成了具有独特特征的图像。样本中折射率或厚度的梯度变化被转化为明暗对比,透明的细胞结构变得清晰可见,呈现出类似三维浮雕的效果。这种技术的最大优势是无需对样本进行染色就能获得高对比度的图像,特别适合观察活细胞和透明的生物样本。DIC显微镜在细胞生物学、材料科学和质量检测等领域有着广泛的应用,是现代光学显微镜技术的重要组成部分。