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单克隆抗体是现代生物技术的重要产物,由单一B淋巴细胞克隆产生,具有高度的特异性和均一性。制备过程包括九个主要步骤,从免疫动物开始,到最终的抗体纯化。首先将特定抗原注射到实验小鼠体内,刺激其产生针对该抗原的B淋巴细胞,这些细胞能够分泌特异性抗体。
细胞融合是制备单克隆抗体的核心技术。B淋巴细胞虽然能产生特异性抗体,但寿命有限,无法长期培养。而骨髓瘤细胞作为癌细胞,具有无限增殖能力,但不产生我们所需的抗体。通过使用聚乙二醇作为促融剂,我们可以将这两种细胞融合,形成杂交瘤细胞。这种杂交瘤细胞结合了两种细胞的优点,既能产生特异性抗体,又能无限增殖。
选择培养是筛选杂交瘤细胞的关键步骤。HAT培养基含有次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸苷三种成分。氨基蝶呤能够阻断细胞正常的DNA合成途径,迫使细胞必须通过补救途径来合成DNA。在这种选择压力下,未融合的B淋巴细胞由于寿命短而自然死亡,未融合的骨髓瘤细胞因缺乏关键酶无法利用补救途径也会死亡,只有杂交瘤细胞具备B细胞的酶系统,能够利用补救途径合成DNA而存活下来。
克隆化培养是获得纯单克隆抗体的重要步骤。通过有限稀释法,将杂交瘤细胞稀释到每个培养孔只含有一个细胞,确保每个克隆都来自单一细胞。然后使用ELISA等方法检测各个克隆分泌的抗体是否具有所需的特异性。通过这种筛选,我们可以识别出产生目标抗体的阳性克隆,并将其进行扩大培养,最终获得大量的单克隆抗体。
单克隆抗体的制备是现代生物技术的重要成果。通过细胞融合技术,我们成功结合了B淋巴细胞产生特异性抗体的能力和骨髓瘤细胞无限增殖的特性。HAT选择培养基的使用确保了只有杂交瘤细胞能够存活,而克隆化培养和特异性检测则保证了最终产品的质量。单克隆抗体因其高度的特异性和均一性,在医学诊断、疾病治疗和科学研究中都有着广泛的应用前景。